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Merck
  • Michaelis-Menten Kinetics Measurements of Aldo-Keto Reductases for Various Substrates in Murine Tissue.

Michaelis-Menten Kinetics Measurements of Aldo-Keto Reductases for Various Substrates in Murine Tissue.

STAR protocols (2020-12-31)
Jakob Morgenstern, Elisabeth Kliemank, Marta Campos Campos, Peter Nawroth, Thomas Fleming
要旨

Aldo-keto reductases (AKRs) are responsible for the detoxification of harmful aldehydes. Due to the large number of isotypes, the physiological relevance of AKRs cannot be obtained using mRNA or protein quantification, but only through the use of enzymatic assays to demonstrate functionality. Here, we present a fast and simple protocol to determine the important Michaelis-Menten kinetics of AKRs, which includes various aldehyde substrates of interest such as 4-hydroxynonenal, methylglyoxal, and malondialdehyde. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to Morgenstern et al. (2017) and Schumacher et al. (2018).

材料
製品番号
ブランド
製品内容

Sigma-Aldrich
プロテアーゼインヒビターカクテル, for use with mammalian cell and tissue extracts, DMSO solution
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Sigma-Aldrich
リン酸ナトリウム 一塩基性 一水和物, ACS reagent, ≥98%
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Sigma-Aldrich
HEPES, ≥99.5% (titration)
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Sigma-Aldrich
塩化マグネシウム 溶液, Molecular Biology, 1.00 M±0.01 M
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Sigma-Aldrich
2-メルカプトエタノール, ≥99.0%
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Sigma-Aldrich
L-グルタチオン、還元型, ≥98.0%
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Sigma-Aldrich
エチレンジアミン四酢酸, BioUltra, anhydrous, ≥99% (titration)
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Sigma-Aldrich
メチルグリオキサール 溶液, ~40% in H2O
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Sigma-Aldrich
リン酸ナトリウム 二塩基性, BioXtra, ≥99.0%
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Sigma-Aldrich
塩化カリウム, BioXtra, ≥99.0%
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Sigma-Aldrich
4-Hydroxynonenal, 4-Hydroxynonenal, CAS 75899-68-2, is a major aldehyde product formed by peroxidation of ω-6-unsaturated fatty acids that is regarded as a specific marker of lipid peroxidation.
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Sigma-Aldrich
2-AAPA 水和物, ≥95% (HPLC)
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