Epigenetik

Histon-Modifikation

Chromatin ist der Komplex aus genomischer DNA und assoziierten Proteinen im Zellkern. Modifikationen der Chromatinstruktur und das Zusammenspiel der Chromatinproteine spielen eine direkte Rolle bei der epigenetischen Regulation. Die Struktur des Chromatins wird durch Histone, eine Hauptklasse von Chromatinproteinen, unterstützt. Histone bilden das Nukleosom, einen Komplex mit je zwei Untereinheiten der Histone H2A, H2B, H3 und H4. An der Außenseite des Kernkomplexes besetzt das Linker-Histon H1 die internukleosomale DNA. Dieser Nukleosomenkomplex hält die kompakte Struktur des Chromatins aufrecht. Ortsspezifische Histonmodifikationen wie Methylierung, Acetylierung, Phosphorylierung, Ubiquitinierung und Citrullinierung können die lokale Chromatinstruktur verändern und die Transkription, Reparatur, Rekombination und Replikation regulieren. Nicht-Histon-Proteine, die mit Chromatin assoziiert sind, sind eine vielfältige Gruppe mit Tausenden von verschiedenen Proteintypen, darunter Transkriptionsfaktoren, Polymerasen, Hormonrezeptoren und andere Kernenzyme.

DNA-Methylierung

DNA-Methylierung ist ein wichtiger epigenetischer Mechanismus, der das Gen-Silencing, das Imprinting, die Embryonalentwicklung und die Chromosomenstabilität reguliert. Die DNA-Methylierung erfolgt an der 5-Kohlenstoff-Position von Cytosinresten hauptsächlich innerhalb von CpG-Dinukleotiden und bildet 5-Methylcytosine (5-mC). Die Reaktion wird durch DNA-Methyltransferasen (DNMTs) katalysiert. 5-Methylcytosinreste können auch durch TET-Enzyme hydroxyliert werden, um 5-Hydroxymethylcytosin (5-hmC) zu bilden, das eine andere Funktion als 5-mC hat. Wir bieten robuste Werkzeuge, mit denen Sie nicht nur 5-mC und 5-hmC nachweisen und quantifizieren, sondern auch genau zwischen diesen Modifikationen unterscheiden können.

Chromatin Immunoprecipitation (ChIP) Kits

Der quantitative Nachweis von Histonmodifikationen ist wichtig für ein besseres Verständnis der epigenetischen Regulierung von zellulären Prozessen in normalem oder Krebsgewebe. Die am weitesten verbreitete Technik zur Untersuchung des Einflusses von Histonmodifikationen und anderen DNA-bindenden Proteinen, wie z. B. Transkriptionsfaktoren, auf die Genexpression ist die Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP) in Kombination mit der qualitativen Polymerase-Kettenreaktion (qPCR). Bei der ChIP werden Proteine chemisch mit DNA-Sequenzen vernetzt, und anschließend werden die vernetzten Komplexe mit Hilfe von Antikörpern und Kügelchen immunpräzipitiert, um die modifizierten Histone oder andere Proteine von Interesse herauszuziehen. Die am häufigsten untersuchten und am besten verstandenen Histon-Modifikationen sind Acetylierung, Phosphorylierung, Methylierung und Ubiquitinierung. Histonmodifikationen regulieren die DNA-Transkription, -Reparatur, -Rekombination und -Replikation und können die lokale Chromatinarchitektur verändern. Entdecken Sie unser breites Angebot an Kits für die Analyse komplexer Histonmodifikationsmuster.

Transkriptionelle und posttranskriptionelle Kontrolle: RNA-Regulierung

Traditionell konzentrierte sich die Genexpressionsforschung auf die Transkriptionsregulierung durch die Interaktion von Transkriptionsfaktoren mit spezifischen Bindungsstellen, Modifikationen von Histonen innerhalb des Chromatins und die koordinierte Chromatindynamik in Verbindung mit Veränderungen der Gentranskription. Die heutige Genexpressionsforschung versucht, die Dynamik der RNA-Regulierung zu verstehen, mit dem Ziel, die Lücke zwischen Transkriptionskontrolle und Proteinexpression zu schließen. RNA-bindende Proteine (RBPs) spielen eine Schlüsselrolle bei der posttranskriptionellen Regulation der Genexpression.

RNA-Regulation: RNA-binding Protein Immunoprecipitation (RIP) Kits

RIP kann als das RNA-Analogon der bekannteren ChIP-Anwendung betrachtet werden. RIP kann zur Identifizierung spezifischer RNA-Moleküle verwendet werden, die mit bestimmten kernständigen oder zytoplasmatischen Bindungsproteinen assoziiert sind. RIP beginnt mit der Immunpräzipitation endogener Komplexe von RNA-bindenden Proteinen und der Ko-Isolierung von RNA-Spezies, die mit dem immunpräzipitierten Komplex assoziiert sind. Nach der Reinigung dieser RNA-Spezies können sie durch eine Vielzahl von Anwendungen wie quantitative RT-PCR, Microarray-Analyse (RIP-Chip) und Hochdurchsatz-Sequenzierung (RIP-Seq) untersucht und als mRNAs oder nichtcodierende RNAs identifiziert werden.