Polymerase-Kettenreaktion (PCR) Anwendungen
Die Polymerase-Kettenreaktion (PCR) ist eine leistungsstarke molekularbiologische Kerntechnik, die eine effiziente und schnelle in vitro-Methode für die enzymatische Amplifikation spezifischer DNA- oder RNA-Sequenzen aus verschiedenen Quellen darstellt. Eine Standard-PCR besteht aus der Ziel-DNA, einem Satz synthetischer Oligonukleotid-Primer, die die Ziel-DNA-Sequenz flankieren, einer thermostabilen DNA-Polymerase (normalerweise Taq-Polymerase) und Nukleotiden. Bei der Verwendung von Thermocyclern durchläuft jeder Amplifikationszyklus drei Phasen: Denaturierung der doppelsträngigen DNA (dsDNA) in separate einzelsträngige DNA, Annealing der Primer an die Ziel-DNA-Sequenz und Extension, bei der die DNA-Polymerase die DNA von den Primern verlängert und so neue dsDNA mit einem alten und einem neuen Strang erzeugt. Die in einem Zyklus synthetisierten Stränge dienen im nächsten Zyklus als Vorlage, was zu einer millionenfachen Vergrößerung der DNA-Menge in nur 20 Zyklen führt.
Verwandte Produkte
Besondere Kategorien
Molekulare Klonierungs- und Proteinexpressionsmethoden und -protokolle für die zuverlässige Klonierung und robuste Proteinexpression aus Insekten-, Bakterien- und Säugetier-Proteinexpressionsvektoren.
Epigenetische Reagenzien und Ressourcen zur Untersuchung von RNA-Spezies, DNA-Methylierung, Chromatinmodifikationen und Histonmodifikationen.
Umfassende Analyse des Darmmikrobioms: Entdecken Sie eine ganzheitliche Lösung, die Probenvorbereitung, Sequenzierung, Bioinformatik und Statistik umfasst. Von 16S bis WGS.
Reverse Transkriptase-PCR (RT-PCR)
RT-PCR, oder reverse Transkriptase-PCR, ist eine Variante der Standard-PCR-Technik, bei der spezifische mRNA aus sehr kleinen Proben amplifiziert wird. Damit entfällt der mühsame Prozess der mRNA-Reinigung, der bei herkömmlichen Klonierungsverfahren erforderlich ist. Bei der RT-PCR werden zusätzlich zu den Standard-PCR-Reagenzien reverse Transkriptase und eine RNA-Probe verwendet. Das Reaktionsgemisch wird auf 37 ˚C erhitzt, so dass die reverse Transkriptase eine komplementäre cDNA-Kopie aus der RNA-Probe herstellen kann. Diese cDNA bindet dann an einen der Primer, was zur Synthese des ersten Strangs führt. Daran schließt sich die Standard-PCR an, bei der schließlich dsDNA erzeugt wird. Die RT-PCR wird häufig mit der Echtzeit-PCR (qPCR) kombiniert, die für die Quantifizierung von Transkriptionsmengen in Zellen und Geweben weit verbreitet ist.
Hot-Start-PCR
Die Hot-Start-PCR ist eine Technologie, die die Hot-Start-Taq-Polymerase oder den Einbau modifizierter dNTPs während des Reaktionsaufbaus hemmt, bis ein Wärmeaktivierungsschritt erfolgt. Es stehen verschiedene Methoden zur Verfügung, um die Aktivität der Hot-Start-Polymerase zu hemmen, darunter chemische Modifikation, Antikörper-vermittelte und Aptamer-vermittelte Methoden.
Endpunkt-PCR für lange und genaue Target-Amplifikation
Die Endpunkt-PCR wird häufig eingesetzt, um das Vorhandensein von Targets und deren relative Häufigkeit am Ende der Reaktion zu bestimmen. Die begrenzte Länge der bei der Standard-PCR erzeugten Sequenzen (ca. 5 kb) wird zum Teil durch die Einbeziehung zusätzlicher Faktoren überwunden, die für eine "Korrekturlese"-Aktivität sorgen. Bei der langen und genauen (LA) PCR wird eine zweite thermostabile Polymerase mit einer 3′→5′-Exonuklease eingesetzt, um terminale Nukleotidfehlverknüpfungen zu reparieren, was zu einer deutlich erhöhten Zuverlässigkeit und der Fähigkeit führt, DNA-Ziele mit einer Länge von bis zu 40 kb zu amplifizieren.
Besuchen Sie unsere Dokumentensuche für Datenblätter, Zertifikate und technische Dokumentation.
Verwandte Artikel
- This page shows PCR and RT-PCR amplification troubleshooting.
- Digital PCR enables absolute quantification and detection of minority sequences against similar majority sequences, such as somatic mutations.
- Ethidiumbromid ist ein bekannter und verbreitet eingesetzter fluoreszierender Farbstoff für die biotechnologische Forschung.
- Die Polymerase-Kettenreaktion ist eine der am häufigsten verwendeten Techniken in der Molekularbiologie. Der PCR-Prozess besteht aus drei Hauptschritten: Denaturierung, Hybridisierung und Elongation
- Der Zweck der Hot-Start-PCR besteht darin, die PCR-Reaktion zu hemmen, um die unspezifische Amplifikation zu reduzieren, die Bildung von Primer-Dimeren zu verhindern und die Produktausbeute zu erhöhen.
- Alle sehen (74)
Verwandte Protokolle
- Lernen Sie die Schritte des Standard-PCR-Protokolls kennen und überprüfen Sie die Reagenzienlisten oder Zyklusparameter. Diese Methode zur routinemäßigen PCR-Amplifikation von DNA verwendet Standard-Taq-DNA-Polymerase.
- Als Hybridisierung wird das Erhitzen und Abkühlen zweier einzelsträngiger Oligonukleotide mit komplementären Sequenzen bezeichnet.
- Erfahren Sie mehr über Methoden zur Berechnung der Schmelztemperatur (Tm) von Oligonukleotiden.
- Der gesamte PCR-Workflow ist anfällig für Faktoren, die zur Variabilität beitragen. Viele der variablen Komponenten sind unvermeidbar, wie z. B. die Herkunft der Probe oder die Notwendigkeit einer reversen Transkription. Die Planung des Assays ist ebenfalls sehr variabel, kann den Unterschied zwischen Erfolg und Misserfolg einer PCR ausmachen und trägt auch zur Reproduzierbarkeit und Empfindlichkeit eines Assays bei.
- Das Protokoll des Extract-N-Amp-Kits bietet eine schnelle DNA-Extraktionsmethode, die in 15 Minuten zu einer PCR-bereiten Probe führt. Der optimierte PCR ReadyMix sorgt für eine erfolgreiche und saubere Amplifikation. Der RED-Ladefarbstoff ermöglicht die Probenrückverfolgung.
- Alle sehen (65)
Weitere Artikel und Protokolle finden
Wie können wir helfen
Bei Fragen stellen Sie bitte eine Kundensupportanfrage
oder sprechen Sie mit unserem Kundenservice:
E-Mail [email protected]
oder rufen Sie an unter +1 (800) 244-1173
Zusätzliche Unterstützung
- Chromatogram Search
Use the Chromatogram Search to identify unknown compounds in your sample.
- Rechner & Apps
Web-Toolbox - wissenschaftliche Forschungstools und Informationsquellen für die Bereiche analytische Chemie, Life Science, chemische Synthese und Materialwissenschaft.
- Customer Support Request
Customer support including help with orders, products, accounts, and website technical issues.
- FAQ
Explore our Frequently Asked Questions for answers to commonly asked questions about our products and services.
Um weiterzulesen, melden Sie sich bitte an oder erstellen ein Konto.
Sie haben kein Konto?Um unseren Kunden ein besseres Nutzungserlebnis zu bieten, wurde diese Seite maschinell übersetzt. Unser Ziel ist es, eine möglichst originalgetreue maschinelle Übersetzung zur Verfügung zu stellen. Eine solche Übersetzung ist jedoch nicht perfekt. Wenn Sie mit dem maschinell übersetzten Inhalt nicht zufrieden sind, wechseln Sie bitte zur englischen Webseite.