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Set di anticorpi ChIPAb+ (convalidati per ChIP) anti-trimetilistone H3 (Lys27) e di primer

from rabbit, purified by using Protein A

• Sinonimo/i: Chip Antibody and primer set, H3K27me3 ChIP, H3K27me3, Histone H3 (tri methyl K27), Histone H3K27me3, Histone H3K27me3 ChIP
• Codice UNSPSC: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.32

Proprietà

• Origine biologica: rabbit
• Livello qualitativo: 100
• Clone: polyclonal
• Purificato mediante: using Protein A
• Reattività contro le specie: human, mouse
• Produttore/marchio commerciale: ChIPAb+; Upstate^®
• tecniche: ChIP: suitable; western blot: suitable
• N° accesso NCBI: NP_003484
• N° accesso UniProt: Q16695
• Condizioni di spedizione: dry ice
• Informazioni sul gene: human ... H3F3B(3021)

Descrizione

Descrizione generale

17 kDa

La metilazione degli istoni può verificarsi su due diversi residui: arginina o lisina. Essa può essere associata all'attivazione o alla repressione della trascrizione, a seconda del residuo metilato. La lisina 27 dell'istone H3 può essere mono-, di- o trimetilata (istone H3 monometil Lys27, istone H3 dimetil Lys27 o istone H3 trimetil Lys27) da parte di diverse istone metiltransferasi come EZH2 o NSD3. La metilazione di questo residuo è associata principalmente alla repressione trascrizionale.

Tutti gli anticorpi ChIPAb+ vengono singolarmente convalidati per confermare la precipitazione della cromatina, ogni lotto,
sempre. Ogni set di anticorpi ChIPAb+ comprende primer di controllo (ogni lotto testato mediante qPCR) per convalidare biologicamente i tuoi risultati di IP in un contesto locus-specifico. Per permettere ai ricercatori di convalidare i protocolli di ChIP quando usano i nostri anticorpi nel loro specifico contesto cromatinico, si forniscono anche il protocollo della qPCR e le sequenze dei primer.
Ogni set comprende anche un anticorpo di controllo negativo per verificare la specificità della reazione di ChIP. Il set trimetil-istone H3 (Lys27) ChIPAb+ comprende l'anticorpo anti-trimetil-istone H3 (Lys27), un anticorpo di controllo negativo (IgG di coniglio purificate) e primer per qPCR che amplificano una regione di 139 bp dell′alfa-satellite umano. Gli anticorpi anti-trimetil-istone H3 (Lys27) e i controlli negativi sono forniti in un formato di reazione "per ChIP" scalabile e possono essere utilizzati per convalidare funzionalmente la precipitazione della cromatina associata al trimetil-istone H3 (Lys27).

Immunogeno

Epitopo: Trimetil Lys27

Peptide sintetico con due ramificazioni coniugato con KLH contenente la sequenza ...AR(me3K)SAP..., in cui me3K corrisponde alla trimetil-lisina al residuo 27 dell′istone H3 umano.

Applicazioni

Anticorpo anti-trimetil-istone H3 (Lys27) convalidato per ChIP & set di primer che comprende l′anticorpo per ChIP & i primer specifici di controllo per PCR utilizzati per l′immunoprecipitazione di H3K27Me3.

Categoria di ricerca
Epigenetica & funzione nucleare

Immunoprecipitazione della cromatina
La cromatina sonicata ottenuta da 2x10⁶ cellule HeLa è stata immunoprecipitata utilizzando 4 μg di anticorpo anti-trimetil-istone H3 (Lys27) purificato o IgG di coniglio normale e il kit Magna ChIP A (N° Cat. 17-610). L′avvenuto arricchimento dei frammenti di DNA associati al trimetil-istone H3 (Lys27) è stato verificato mediante qPCR utilizzando primer per ChIP specifici per la GAPDH, che fiancheggiano il promotore del gene GAPDH umano, e i primer specifici per il promotore del gene MyoD umano.
Per i dettagli sperimentali, consultare i protocolli del kit EZ-Magna ChIP A (N° Cat. 17-408) o del kit EZChIP (N° Cat. 17-371).

Analisi mediante Western blotting
L′istone H3 ricombinante (corsia 2) e gli estratti acidi di cellule HeLa (corsia 1) sono stati risolti mediante elettroforesi, trasferiti su nitrocellulosa e analizzati con una diluizione 1:5000 di anti-trimetilistone H3 Lys27 (0,4 μg/mL).
Le proteine sono state evidenziate con l′impiego di un anticorpo secondario di capra anti-coniglio coniugato con HRP e un sistema di rivelazione in chemiluminescenza (vedere figure).

Sotto categoria di ricerca
Istoni

Azioni biochim/fisiol

Prevista reattività crociata con molte specie.

trimetil istone H3 (Lys27)

Confezionamento

25 saggi per kit, circa 4 μL per immunoprecipitazione della cromatina.

Stato fisico

Anti-trimetil istone H3 (Lys27) (IgG policlonali di coniglio). Una microprovetta contenente 100 μg di IgG purificate su proteina A in 100 μL di tampone contenente 0,1 M di Tris-glicina, pH 7,4, 0,15 M di NaCl con lo 0,05% di azoturo di sodio. Conservare a -20 °C.

IgG di coniglio normale. Una fiala contenente 125 μg di IgG di coniglio purificate in 125 μL di tampone di conservazione contenente lo 0,1% di azoturo di sodio. Conservare a -20 °C.

Primer per ChIP per alfa-satellite umano. Una microprovetta contenente 75 μL di ciascun primer di controllo specifico per l′alfa-satellite umano ad una concentrazione di 5 μM. Conservare a -20 °C.
FOR: CTG CAC TAC CTG AAG AGG AC
REV: GAT GGT TCA ACA CTC TTA CA

Nota sulla preparazione

1 anno a -20 °C dalla data di spedizione

Risultati analitici

Controllo
1 fiala contenente 75 μl di ciascun primer di controllo specifico per l′alfa-satellite umano ad una concentrazione 5 μM. Conservare a -20 °C.

FOR: CTG CAC TAC CTG AAG AGG AC

REV: GAT GGT TCA ACA CTC TTA CA

Immunoprecipitazione della cromatina
La cromatina sonicata ottenuta da 3x10⁶ cellule NIH3T3 L1 è stata immunoprecipitata utilizzando 4 μg di anticorpo purificato o IgG di coniglio normale e il kit Magna ChIP^® A (N° Cat. 17-610). L′avvenuto arricchimento dei frammenti di DNA associati al trimetil-istone H3
(Lys27) è stato verificato mediante qPCR utilizzando i primer per ChIP specifici per alfa-satellite umano (vedere le figure).
Per i dettagli sperimentali, consultare i protocolli del kit EZ-Magna ChIP A (N° Cat. 17-408) o del kit EZ-ChIP (N° Cat. 17-371).

Altre note

Anti-trimetil istone H3 (Lys27) policlonale, 1 fiala

Siero policlonale di coniglio controllo, 1 fiala

Set di primer per alfa-satellite umano, 1 fiala

Note legali

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Esclusione di responsabilità

Salvo diversa indicazione nel nostro catalogo o in altra documentazione fornita dall′azienda insieme al prodotto, i nostri prodotti sono destinati esclusivamente a scopi di ricerca e non devono essere utilizzati per altre finalità, inclusi a titolo esemplificativo ma non esaustivo, fini commerciali non autorizzati, applicazioni diagnostiche in vitro, usi terapeutici ex vivo o in vivo o qualsiasi altro tipo di assunzione o applicazione rivolta agli esseri umani o agli animali.

Informazioni sulla sicurezza

• Codice della classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids
• Punto d’infiammabilità (°F): Not applicable
• Punto d’infiammabilità (°C): Not applicable