Fotometria e riflettometria

La fotometria è la misura della luce assorbita nell'intervallo tra ultravioletto (UV), visibile (VIS) e infrarosso (IR). Questa misura viene utilizzata per determinare la quantità di un analita in una soluzione o in un liquido. I fotometri utilizzano una sorgente luminosa specifica e rivelatori che convertono la luce passata attraverso una soluzione campione in un segnale elettrico proporzionale. Questi rilevatori possono essere, ad esempio, fotodiodi, fotoresistori o fotomoltiplicatori. La fotometria utilizza la legge di Beer-Lambert per calcolare i coefficienti ottenuti dalla misura della trasmittanza. Una correlazione tra l'assorbanza e la concentrazione dell'analita viene quindi stabilita da una funzione di calibrazione specifica per il test, per ottenere misurazioni altamente precise.
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Fotometria
La fotometria è un'analisi quantitativa ampiamente utilizzata nei laboratori di ricerca per determinare le quantità di composti inorganici e organici in soluzioni e altri liquidi. La fotometria ha anche ampie applicazioni industriali nella determinazione dei contaminanti nelle acque potabili e reflue, nell'analisi dei nutrienti nel suolo, nei campioni di alimenti e bevande, nella composizione dei materiali da costruzione e in molti altri settori.
Costruzione e funzionamento del fotometro
I componenti di un tipico fotometro comprendono una sorgente luminosa, un monocromatore, un campione e un rilevatore. Le sorgenti luminose possono essere lampade alogene al tungsteno (generalmente la fonte di luce utilizzata per le analisi nella gamma della luce visibile) o LED. Per le misure nell'intervallo UV-Visibile si può utilizzare una lampada flash allo xeno. Il monocromatore filtra la luce irradiata dalla sorgente luminosa per consentire il passaggio solo di uno spettro molto ristretto. La luce passa quindi attraverso la cuvetta o la cella di contenimento del campione. In base alla quantità di analita (o di un colorante da esso derivato) presente nella soluzione del campione, una parte della luce viene assorbita dalla soluzione e il resto viene trasmesso. La luce trasmessa è diretta verso i rivelatori, che producono una corrente elettrica proporzionale all'intensità luminosa.
Legge di Beer-Lambert
La legge di Beer-Lambert, nota anche come legge di Beer, afferma che la quantità di luce assorbita da un campione è direttamente proporzionale alla concentrazione dell'analita presente e alla lunghezza del percorso della luce attraverso il campione. Per "campione" in questo contesto si intende l'analita stesso (misurazione diretta) o un colorante derivato dall'analita (quando si utilizzano reagenti o kit). La relazione è descritta dalla formula:
A = elc |
|
dove |
|
A = assorbanza del campione |
|
Trasmittanza(T)=It/Io |
|
It e Io sono rispettivamente l'intensità della luce dopo e prima del passaggio attraverso la soluzione. La trasmittanza è legata all'assorbanza dall'equazione: |
|
Assorbanza(A)=-log(T) |
Riflettometria
La riflettometria (nota anche come fotometria a remissione) è una tecnica analitica non distruttiva che utilizza la riflessione della luce da parte di superfici e interfacce per misurare caratteristiche quali l'intensità del colore, lo spessore del film e l'indice di rifrazione.
Come gli altri fotometri, gli elementi principali dei riflettometri comprendono una sorgente luminosa, di solito LED a lunga durata e con lunghezze d'onda specifiche, che viene focalizzata sulla superficie del campione tramite un sistema di lenti e la luce riflessa viene misurata da rilevatori.
I riflettometri sono spesso progettati per misurare caratteristiche fisiche delle superfici, come le variazioni di colore su una striscia di prova. In questo approccio, un campione può essere posto su una striscia di prova e il suo valore di remissione (REM) può essere confrontato con controlli e standard appropriati. Come nella fotometria, la differenza di intensità tra la luce emessa e quella riflessa consente di determinare quantitativamente la concentrazione di specifici analiti.
La riflettometria è comunemente utilizzata nelle applicazioni industriali come metodo rapido e sensibile per la quantificazione di un'ampia varietà di parametri organici e inorganici in acqua, alimenti, bevande e campioni ambientali, oltre che per altri usi diversi come l'analisi delle superfici dei materiali da costruzione e la quantificazione del colore della pelle.
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