Odczynniki i podłoża do immunodetekcji
W metodzie Western blot najważniejszym czynnikiem decydującym o powodzeniu eksperymentów jest jakość stosowanych odczynników. Oferujemy szereg odczynników do Western blot, które są wstępnie zoptymalizowane do synergicznego działania, zapewniając silne specyficzne sygnały i niskie tło, aby pomóc w szybkim uzyskaniu wyników o jakości publikacji.
Produkty
Odczynniki blokujące
Blokowanie niezwiązanych miejsc na błonie zapobiega niespecyficznemu wiązaniu przeciwciał, które może prowadzić do wysokiego tła. Tradycyjne blokery na bazie mleka, żelatyny i innych białek są skuteczne w wielu zastosowaniach blottingu, ale mogą zmniejszać czułość lub wykrywanie poprzez maskowanie sygnału lub zakłócanie wykrywania określonych docelowych białek.Odczynniki Immobilon® Block Noise Cancelling Reagents zawierają bezbiałkowe, gotowe do użycia bufory zoptymalizowane w celu zmniejszenia poziomu tła podczas wykrywania chemiluminescencji, fluorescencji lub fosfoprotein.
Przewodnik wyboru odczynników blokujących Western Blot | |||||
|---|---|---|---|---|---|
Jeśli chcesz... | Używaj... | Dla blotów chemiluminescencyjnych | Dla blotów kolorymetrycznych | Dla blotów fluorescencyjnych | Dostarczany jako |
W celu wzmocnienia sygnału przeciwciała białkiem roślinnym | Immobilon Signal Enhancer (WBSH0500) | Tak | Tak | Tak | Gotowy do użycia |
Bezbiałkowy bloker zoptymalizowany do detekcji chemiluminescencyjnej | Immobilon Block-CH (WBAVDCH01) | Best | tak | Nie | Gotowy do użycia |
Bezbiałkowy bloker zoptymalizowany do wykrywania fluorescencji< | Immobilon Block-FL (WBAVDFL01) | Nie | Nie | Best | Gotowy do użycia |
Bezbiałkowy bloker zoptymalizowany do wykrywania fosfoprotein | Immobilon Block-PO (WBAVDP001) | Tak | Tak< | Tak | Gotowy do użycia |
Odczynnik blokujący z białkami niepochodzącymi od ssaków | Aquatic Block Reagent, Salmon Plasma (558300) | tak | Tak | Nie | Gotowy do użycia |
Odczynnik blokujący zoptymalizowany dla koniugatów HRP | . Western Blocker Solution (W0138) | Tak | Tak | Nie | Gotowy do użycia |
Bulk quantity non-fat dry milk | Immunoblot Blocking Reagent (20-200) | Tak | Tak | Nie | Bulk Powder |
Buforowane suche mleko beztłuszczowe | Sól fizjologiczna buforowana fosforanami z 5% beztłuszczowym suchym mlekiem (P4739) | Tak | Tak | Nie | Porcjowany proszek |
Aby spersonalizować stężenie blokujące dla | 5% kazeina rozpuszczalna w zasadach (70955) | Tak | Tak | Tak | Stężony roztwór |
Bezbiałkowe blokowanie zoptymalizowane dla systemów detekcji awidyna-biotyna | ChemiBLOCKER (2170) | Tak | Tak | Nie | .Stężony roztwór |
Blokowanie próbek białek i kwasów nukleinowych na membranach nitrocelulozowych lub nylonowych | Bufor blokujący żelatynę (G7663) | Tak | Tak | Tak | Bulk Powder |
Koniugaty streptawidyny i przeciwciał drugorzędowych
Nowoczesne metody immunodetekcji opierają się na detekcji enzymatycznej przy użyciu streptawidyny lub przeciwciał drugorzędowych kowalencyjnie związanych z enzymami, takimi jak peroksydaza chrzanowa (HRP) lub fosfataza alkaliczna (AP). Sprzężony enzym katalizuje degradację określonych substratów, powodując generowanie sygnału. Dostępne są różne koniugaty streptawidyny, białka A, białka G i przeciwciał drugorzędowych do Western blotting. Oferujemy również szeroki wybór substratów HRP i AP do chemiluminescencyjnego, chromogennego i chemifluorescencyjnego wykrywania w Western blotting.
CHEMILUMINESCENT SUBSTRATES FOR WESTERN BLOTTING
Immobilon® Substraty HRP do detekcji chemiluminescencyjnej zapewniają zwiększoną czułość dla bardziej ilościowych blotów, redukując koszty poprzez umożliwienie zmniejszenia stężenia przeciwciała używanego do detekcji.Wybierz z portfolio substratów Immobilon® o różnej czułości w wygodnych, gotowych do użycia lub dwuskładnikowych formatach, aby zoptymalizować wykrywanie dla aplikacji Western blotting.
- Podłoża chemiluminescencyjne Immobilon® Classico, Crescendo i Forte.obejmują rodzinę wstępnie zmieszanych, gotowych do użycia odczynników do wykrywania opartego na peroksydazie, oferowanych w zakresie czułości, aby zapewnić optymalny stosunek sygnału do tła w całym spektrum docelowych stężeń białka.Granice wykrywalności:
- Immobilon® Classico: ~ 6 pg białka docelowego
- Immobilon® Crescendo:~ 1-3 pg białka docelowego
- Immobilon® Forte: ~ 400 fg białko docelowe
- Immobilon® Western HRP, Immobilon® ECL Ultra i Immobilon® UltraPlus Western zapewniają wyjątkową czułość i długą żywotność sygnału w standardowych 2-składnikowych formatach. Formuły te pozwalają na stosowanie bardziej rozcieńczonych roztworów przeciwciał pierwotnych do wykrywania immunoblot. Granice wykrywalności:
- Immobilon® Western HRP substrate: ~ 400 fg białka docelowego
- Immobilon® Podłoże ECL Ultra: niski zakres femtogramów
- Immobilon® Podłoże ECL UltraPlus Western Blot HRP: niski zakres femtogramów
Względna czułość podłoży chemiluminescencyjnych HRP Immobilon®
Rysunek 1.Serię dwukrotnych rozcieńczeń lizatu komórek A431 [12-110], począwszy od 4 μg białka, nanoszono na 10% żele mPAGE® [MP10W15] w buforze MOPS [MPM0PS] przy napięciu 200 V przez 25 minut. Białko przeniesiono na membranę Immobilon®-P [IPVH00010] na 1 godzinę w buforze transferowym mPAGE® [MPTRB] z 10% etanolem. Immunodetekcję białka HH3 (15 kDa) przeprowadzono za pomocą króliczych przeciwciał anty-HH3 [H0164] i kozich przeciwciał anty-króliczych [AP132P] w wymienionych rozcieńczeniach. Bloty inkubowano ze wskazanymi odczynnikami ECL przez 5 minut, a obrazy wykonano z 30-sekundową ekspozycją w systemie Bio-Rad® ChemiDoc.
Odczynniki do wykrywania ECL firmy Cytiva™ Amersham™ wykorzystują wzmocnioną detekcję opartą na luminolu HRP z różnymi dostępnymi formułami w celu pokrycia różnych potrzeb aplikacji Western blotting.
- Odczynniki do detekcji ECL Western blot są zalecane do potwierdzających aplikacji Western blot.
- Odczynnik do wykrywania Western blot ECL Prime firmy Cytiva™ Amersham™ umożliwia wykrywanie zarówno białek o wysokiej, jak i niskiej obfitości na tej samej plamie.
- Odczynniki do wykrywania Western blot ECL Select firmy Cytiva Amersham™ oferują wysoką czułość nawet przy użyciu rozcieńczonych przeciwciał pierwotnych i wtórnych.
- Cytiva Amersham™ ECL Start odczynnik do wykrywania Western Blotting został opracowany do chemiluminescencyjnego wykrywania białek o średniej i wysokiej ekspresji.
CHROMOGENIC SUBSTRATES FOR WESTERN BLOTTING
Detekcja chromogeniczna wykorzystuje peroksydazę (np, HRP) lub enzym sprzężony z fosfatazą alkaliczną (AP) do katalizowania reakcji, która powoduje osadzanie się nierozpuszczalnego barwnego osadu do wykrywania. Nasze substraty chromogeniczne do Western blotting są dostępne w postaci roztworu, proszku i tabletek, aby zapewnić elastyczne opcje przechowywania i użytkowania.
- SIGMAFAST™ DAB Tablets (chromogenny substrat HRP)składają się z kolorymetrycznego substratu strącającego, który wytwarza brązowy kolor w reakcji z peroksydazą chrzanową i może być rozpuszczony w wodzie w celu przygotowania gotowego do użycia buforowanego roztworu do wykrywania blottingu.
- BCIP/NBT (niebieski/fioletowy) i BCIP/TNBT (niebieski/brązowy) Single Reagent (chromogenne substraty AP) są wysoce czułymi substratami kolorymetrycznymi dla fosfatazy alkalicznej.
- TMB Enhanced One Component HRP Membrane Substrate (chromogeniczny substrat HRP) to jednoskładnikowy substrat kolorymetryczny, który wytwarza ciemnoniebieski produkt.
Podłoże | Kolor | Enzym | Wrażliwość |
|---|---|---|---|
BCIP/NBT | Błękit/fiolet | AP | High |
Fast Red TR (4-Chloro-2-methylbenzenediazonium)< | Czerwony/pomarańczowy | AP | Wysoki |
DAB (3,3'-Diaminobenzydyna) | Brązowy | HRP | Średni |
TMB (3,3′,5,5'-tetrametylobenzydyna) | Ciemnoniebieski | HRP | Wysoki |
CN (4-chloro-1-naftol) | Niebieski/fioletowy | HRP | Niski |
Signal Enhancers
- Immobilon® Signal Enhancer jest przeznaczony do stosowania w aplikacjach Western blotting, gdy obserwuje się niską intensywność sygnału. Wzmocnienie reakcji przeciwciało-antygen może spowodować 2 do 10-krotny wzrost intensywności sygnału. Immobilon® Signal Enhancer jest kompatybilny z membranami PVDF i nitrocelulozowymi i może być stosowany z chromogenicznymi, chemiluminescencyjnymi i fluorescencyjnymi metodami detekcji.
- SignalBoost™ Immunoreaction Enhancer Kit został zaprojektowany w celu wzmocnienia chemiluminescencyjnego lub kolorymetrycznego sygnału docelowego na membranach nitrocelulozowych lub PVDF
Odczynniki i zestawy do strippingu i reprobingu
Odczynniki do strippingu i reprobingu zostały specjalnie opracowane w celu szybkiego i skutecznego usuwania przeciwciał z Western blot bez znaczącego wpływu na unieruchomione białka.
- Odczynniki ReBlot™ Plus skutecznie usuwają sondowane bloty ze związanych przeciwciał. Odczynniki ReBlot™ Plus są dostępne w łagodnych i silnych formułach.
Powiązane zasoby
- Handbook: Protein Blotting Tips and Tricks
This handbook represents the collective experience of our application scientists, who are actively engaged in advancing the science of protein blotting and detection.
- Brochure: Rethink Western Blotting
Explore our products designed to improve each step of the Western blotting workflow.
- Article: Western Blotting Protocol (Immunoblotting Protocol)
Western blot protocol with workflow steps for different blot procedures, describing the electrophoretic transfer of proteins from SDS polyacrylamide gels to sheets of nitrocellulose.
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?Dla wygody naszych klientów ta strona została przetłumaczona maszynowo. Dołożyliśmy starań, aby zapewnić dokładne tłumaczenie maszynowe. Tłumaczenie maszynowe nie jest jednak doskonałe. Jeśli tłumaczenie maszynowe nie spełnia Twoich oczekiwań, przejdź do wersji w języku angielskim.