免疫検出試薬・基質

ブロッキング試薬

メンブレンの未結合部位のブロッキングは、高バックグラウンドを招くおそれのある抗体の非特異的結合を防止します。牛乳、ゼラチンなど従来のタンパク質ベースのブロッカーは、多くのブロッティングアプリケーションに有効ですが、信号をマスキングして特定のタンパク質標的の検出を妨害するため、検出感度を低下させます。 Immobilon^®Block ノイズキャンセリング試薬 は、化学発光、蛍光、またはリン酸化タンパク質検出に使用する際の背景レベルを低減するように最適化された、タンパク質を含まない即用型バッファーです。

ウェスタンブロッティングブロッキング用試薬選択ガイド
使用目的	製品名	化学発光ブロット用	比色ブロット用	蛍光ブロット用	供給形態
抗体シグナルを植物由来タンパク質で増幅	Immobilon シグナルエンハンサー（WBSH0500）	対応	対応	可	Ready-to-use
化学発光検出用に最適化されたタンパク質フリーブロッカー	Immobilon ブロック-CH （WBAVDCH01）	最適	対応	非対応	Ready-to-use
蛍光検出用に最適化されたタンパク質フリーブロッカー	Immobilon ブロック-FL （WBAVDFL01）	不可	不可	最適	Ready-to-use
リンタンパク質検出用に最適化されたタンパク質フリーブロッカー	Immobilon ブロック-PO （WBAVDP001）	対応	対応	可	Ready-to-use
非哺乳類タンパク質によるブロッキング試薬	Aquatic Block Reagent、Salmon Plasma （558300）	対応	可	非対応	Ready-to-use
HRP結合体用に最適化されたブロッキング試薬	Western Blocker Solution （W0138）	対応	可	非対応	Ready-to-use
バルク量の無脂肪乳	イムノブロットブロッキング試薬（20-200）	対応	可	非対応	バルク粉末
緩衝済み無脂肪乳含有	5%無脂肪乳含有リン酸緩衝生理食塩水（P4739）	対応	可	非対応	分包粉末
非ビオチン化検体用にブロッキング濃度を個別化	5%アルカリ溶解性カゼイン（70955）	対応	対応	可	濃縮溶液
アビジン-ビオチン検出系用に最適化されたタンパク質フリーブロッキング	ChemiBLOCKER （2170）	対応	可	非対応	濃縮溶液
ニトロセルロースまたはナイロンメンブレン上のタンパク質検体および核酸検体の両方をブロック	ゼラチンブロッキングバッファー（G7663）	対応	対応	可	バルク粉末

ストレプトアビジン・二次抗体の複合体

現代の免疫検出法は、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（HRP）またはアルカリホスファターゼ（AP）などの酵素に共有結合したストレプトアビジンまたは二次抗体を利用する、酵素結合検出法に基づいています。標識酵素は、特定の基質の分解を触媒し、シグナルの生成を引き起こします。ウェスタンブロッティング用にストレプトアビジン、プロテイン A、プロテイン G、および二次抗体の各種コンジュゲートをご用意しています。私たちは、ウェスタンブロッティングで行う化学発光法、発色法、化学蛍光法の検出のための、HRPおよびAP基質を幅広く取り揃えています。

ウェスタンブロッティング用化学発光基質

化学発光検出用の Immobilon^® HRP基質により、感度が改善されより定量的なブロットが得られ、検出に使用する抗体濃度を低下させることにより費用が削減されます。さまざまな感度を持つ Immobilon® 基質から、使いやすいすぐに使えるタイプまたは 2 成分タイプをお選びいただき、ウェスタンブロッティング用途に最適な検出を実現してください。

Immobilon^®Classico・Crescendo・Forte 化学発光基質は、ペルオキシダーゼベースの検出法のためプレミックスされた、すぐに使える試薬ファミリーで構成されており、広範囲の標的タンパク質濃度にわたり最適な信号対バックグラウンド比が得られるよう、一定範囲の感度で提供されます。検出限界：
- Immobilon^®Classico：標的タンパク質約 6 pg
- Immobilon^®Crescendo：標的タンパク質約 1 ～ 3 pg
- Immobilon^®Forte：標的タンパク質約 400 fg
Immobilon^® Western HRP、Immobilon^® ECL Ultra、Immobilon^® UltraPlus Western基質は、標準的な2液混合型の製品で、卓越した感度と長い信号寿命を提供します。これらの製剤により、より低濃度の一次抗体溶液をイムノブロット検出に使用することができます。検出限界を以下に示します。
- Immobilon^® Western HRP基質：標的タンパク質　約400 fg
- Immobilon^®　ECL Ultra基質：低フェムトグラムの範囲
- Immobilon^® ECL UltraPlus Western Blot HRP基質：低フェムトグラムの範囲

Immobilon^® Chemiluminescent HRP基質の相対感度

2 倍希釈により以下のウェスタンブロッティング用の Immobilon® 化学発光基質の相対感度を示す：Classico（低感度）、Crescendo、Forte、Ultra、UltraPlus（高感度）

図1.A431細胞ライセート[12-110]をタンパク質4 μgから2倍希釈し、10% mPAGE^®ゲル[MP10W15]でMOPSバッファー[MPM0PS]中で200V・25分間泳動した。タンパク質を10%エタノール含有mPAGE^®トランスファーバッファー[MPTRB]中でImmobilon^®-Pメンブレン[IPVH00010]に転写した。HH3タンパク質（15 kDa）の免疫検出を、ウサギ抗HH3抗体[H0164]およびヤギ抗ウサギ抗体[AP132P]を用いて、一覧に示した希釈倍率で実施した。ブロットを指定のECL試薬と5分間インキュベーションして、Bio-Rad^® ChemiDocシステムで30秒間露光により画像を撮影した。

強化型ルミノールベースの HRP 検出法を使用する Cytiva™ Amersham™ ECL 検出試薬は、さまざまなウェスタンブロッティングアプリケーションのニーズに対応できる各種製剤を取り揃えています。（日本国内取扱いなし）

Cytiva Amersham™ ECL ウェスタンブロッティング検出試薬は、確認試験のためのウェスタンブロッティングアプリケーションに推奨されます。
Cytiva Amersham™ ECL Prime ウェスタンブロッティング検出試薬は、多量・微量のタンパク質の両方を同じブロットで検出できるようにします。
Cytiva Amersham™ ECL Select ウェスタンブロッティング検出試薬は、希釈された一次・二次抗体を使用する場合でも高い感度をもたらします。
Cytiva Amersham™ ECL Start ウェスタンブロッティング検出試薬は、中・高発現タンパク質の化学発光検出用に開発されました。

ウェスタンブロッティング用発色基質

発色検出は、反応触媒のためにペルオキシダーゼ（HRPなど）またはアルカリホスファターゼ（AP）標識酵素を使用し、不溶性の着色沈殿物を堆積させることにより検出を行います。私たちのウェスタンブロッティング用発色基質は、溶液、粉末、錠剤で提供していますので、保存や使用に合わせて柔軟にお選びいただけます。

SIGMAFAST™ DAB錠剤（発色HRP基質）は、ホースラディッシュペルオキシダーゼと反応し褐色を発する比色析出基質から成り、水に溶かすことにより、ブロッティング検出にすぐに使用できる緩衝液を調製できます。
BCIP/NBT（青／紫）・BCIP/TNBT（青／褐色）単一試薬（発色AP基質）は、アルカリホスファターゼ用の高感度比色基質です。
TMB強化型1コンポーネントHRPメンブレン基質（発色HRP基質）は、1コンポーネント型の比色基質で、濃青色の生成物を産生します。

基質	色	酵素	感度
BCIP/NBT	青／紫	AP	高い
Fast Red TR（4-クロロ-2-メチルベンゼンジアゾニウム）	赤／橙	AP	高い
DAB（3,3’-ジアミノベンジジン）	褐色	HRP	中程度
TMB（3,3′、5,5’-テトラメチルベンジジン）	濃青	HRP	高い
CN（4-クロロ-1-ナフトール）	青／紫	HRP	低い

シグナルエンハンサー

Immobilon^® シグナルエンハンサー は、観察されるシグナル強度が低い場合でもウェスタンブロッティングアプリケーションを使用できるように設計されています。抗原抗体反応増強により、シグナル強度を2～10倍に増幅することができます。Immobilon^® シグナルエンハンサーは、PVDF およびニトロセルロースメンブレンに適合し、発色・化学発光・蛍光検出法で使用できます。
SignalBoost™ 免疫反応エンハンサーキット は、ニトロセルロースまたは PVDF メンブレン上の化学発光または比色標的シグナルを増幅する設計となっています。

ストリッピング／リプロービング用試薬・キット

ストリッピング試薬およびリプロービング試薬は、固定化タンパク質に重大な影響を与えることなく迅速かつ効果的にウェスタンブロットから抗体を除去するために、特別に調製されています。

ReBlot™ Plus試薬は結合抗体のプロービングブロットを効率的にストリッピングします。ReBlot™ Plus試薬は強・弱処方で提供しています。